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關(guān)鍵詞:自身抗體;自身免疫性疾病;實踐帶教
自身抗體是指針對自身組織、器官、細胞及細胞成分的抗體,可以是生理性的,也可以是病理性的。正常人體血液中可以有低滴度的自身抗體,可能參與衰老細胞或凋亡細胞以及自身免疫復(fù)合物的清除。病理性自身抗體與自身免疫性疾病關(guān)系密切,如果自身抗體的滴度超過某一水平,就可能對身體產(chǎn)生損傷,從而誘發(fā)疾病[1]。抗核抗體(ANA)是抗各種核成分的抗體的總稱,是一種廣泛存在的自身抗體,以真核細胞成分作為靶抗原,主要存在于血清中,也可存在于滑膜液、胸腔積液和尿液等其他體液中[2-3]。自身抗體的檢測在自身免疫性疾病(AID)的診斷、病程活動程度預(yù)測、療效觀察、指導(dǎo)臨床用藥等各方面具有重要的臨床價值[3]。自身抗體檢測作為免疫學(xué)檢驗中的重要分支,雖然實習(xí)生在臨床免疫學(xué)檢驗理論教學(xué)中已有學(xué)習(xí),但教材中相關(guān)部分內(nèi)容涉及不深,特別是抗核抗體熒光核型判讀及在自身免疫性疾病中的臨床應(yīng)用等較為復(fù)雜,最終導(dǎo)致大量實習(xí)生對該部分內(nèi)容無法熟練掌握及實踐操作相對較少[4]。現(xiàn)針對此現(xiàn)象,結(jié)合筆者在臨床免疫學(xué)檢驗多年帶教中的體會,在自身抗體檢測實踐帶教中形成了自己獨有的一套思路和方法。從強化實習(xí)生自身抗體檢測相關(guān)理論知識以及加強理論聯(lián)系實踐技能的系統(tǒng)培訓(xùn)、加強實驗室檢查結(jié)果與臨床案例綜合分析、加強自身抗體檢測實驗室質(zhì)量控制培訓(xùn)以及注重前沿知識的講授等方面,讓實習(xí)生的理論與實踐有機結(jié)合起來,提高他們自身免疫性疾病檢驗專業(yè)知識,以更好地為臨床服務(wù)[5]。現(xiàn)將實踐教學(xué)體會和需要重視的問題總結(jié)如下。
1加強自身抗體檢測的理論學(xué)習(xí)
在臨床檢驗相關(guān)學(xué)科中,免疫學(xué)檢驗的理論與實踐聯(lián)系最為緊密,較好掌握免疫檢驗理論知識是學(xué)好免疫學(xué)的重要前提[5]。自身抗體檢測作為免疫學(xué)檢驗的重點、難點,要求實習(xí)生有一定的理論基礎(chǔ)。在實習(xí)期間,多數(shù)實習(xí)生是按照帶教教師的指導(dǎo)進行操作,他們并未真正掌握相關(guān)實驗原理及實驗?zāi)康模^知其然而不知其所以然[6]。所以在實驗開始之前,帶教教師應(yīng)對實習(xí)生進行自身抗體檢測總體概述及檢測方法介紹,并對目前主流的間接免疫熒光法、免疫印跡法、酶聯(lián)免疫吸附試驗法、化學(xué)發(fā)光法等的實驗原理、實驗?zāi)康囊约皩嶒灢僮髯⒁馐马椀冗M行系統(tǒng)培訓(xùn)[1]。經(jīng)過自身抗體檢測前期培訓(xùn)后,帶教教師有必要每周或每兩周安排至少一次有目的、有計劃的自身抗體檢測相關(guān)理論課,便于實習(xí)生對自身抗體檢測理論知識的學(xué)習(xí)和梳理,也為接下來的實踐操作打下堅實的理論基礎(chǔ)[7]。
2加強自身抗體檢測相關(guān)技能的提升
2.1自身抗體檢測操作技能提升
實習(xí)帶教期間,培養(yǎng)實習(xí)生理論與實踐相結(jié)合,在實際工作中加強其操作技能、分析和解決問題的綜合能力至關(guān)重要[8]。免疫學(xué)檢驗本身就是理論和實踐性很強的一門學(xué)科,然而實習(xí)生在校期間主要是理論學(xué)習(xí),實踐相對較少,從而導(dǎo)致實習(xí)生的實踐操作能力相對較差。因此,在帶教過程中帶教教師要盡可能多給實習(xí)生動手操作機會,讓其充分發(fā)揮自己的主觀能動性[8]。帶教期間教師在旁監(jiān)督,時刻要求實習(xí)生按照檢測項目以及儀器的操作標準來執(zhí)行,確保實驗結(jié)果的準確性以及培養(yǎng)實習(xí)生規(guī)范的操作手法[5]。
2.2自身抗體檢測閱片技能提升
自身抗體的檢測方法主要有間接免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附試驗法、免疫印跡法、化學(xué)發(fā)光法等[1]。其中,自身抗體熒光形態(tài)學(xué)內(nèi)容相對復(fù)雜,既是教學(xué)重點也是難點,要求實習(xí)生多加練習(xí)。要求實習(xí)生厘清免疫熒光檢測原理,掌握熒光模型各時期形態(tài)[9-10]。日常工作中,帶教教師可收集自身抗體相關(guān)的熒光圖譜,定期對實習(xí)生進行自身抗體熒光形態(tài)學(xué)培訓(xùn)和考核,對每次易錯內(nèi)容進行原因分析,通過將理論聯(lián)系實踐,結(jié)合實際,不斷積累經(jīng)驗,讓實習(xí)生對常見的自身免疫性疾病特定的熒光核型有個初步認識,養(yǎng)成良好的閱片習(xí)慣,以便他們今后走上工作崗位具備一定的基礎(chǔ)[4]。
3加強臨床案例與實驗室檢查結(jié)果的綜合分析
3.1案例式教學(xué)的意義
在臨床免疫學(xué)教學(xué)中,帶教教師可結(jié)合臨床案例開展教學(xué),這種案例式教學(xué)通過將真實的臨床案例貫穿于教學(xué)中,激發(fā)了實習(xí)生對學(xué)習(xí)的熱情。實習(xí)生不僅可以積極討論,還可以鞏固所學(xué)免疫學(xué)知識,在一定程度上提高了實習(xí)生理論與實踐相結(jié)合的能力[11]。
3.2典型案例分享
平時帶教教師可收集經(jīng)典的關(guān)于AID的臨床案例,包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性肝病、干燥綜合征等。帶教教師可將案例對實習(xí)生分享。通過真實、直觀的典型案例,不僅可以提高帶教效果,還易于實習(xí)生理解記憶,從而培養(yǎng)他們運用臨床思維解決工作中遇到的實際問題的綜合分析能力等[5]。
4加強自身抗體檢測方面的質(zhì)量控制培訓(xùn)
4.1構(gòu)建實驗室質(zhì)量控制體系
實驗室的質(zhì)量控制體系是確保自身抗體檢測時能排除其影響因素的存在而得到準確的檢測結(jié)果,確保實驗室內(nèi)質(zhì)量控制滿足臨床報告發(fā)放的要求[7]。檢驗結(jié)果的真實準確性直接關(guān)系到臨床的診斷及治療,與患者的生命息息相關(guān)。為保證實驗室質(zhì)量控制效果,必須對實習(xí)生進行全面質(zhì)量控制培訓(xùn)。
4.2掌握自身抗體檢測質(zhì)量控制要點
目前國內(nèi)自身抗體檢測在AID臨床應(yīng)用中已普遍開展,但自身抗體檢測自動化程度相對較低,各個單位采用的檢測儀器不同、試劑不同,結(jié)果沒有可比性,導(dǎo)致檢驗人員對檢測結(jié)果缺乏準確把握,因此掌握自身抗體檢測質(zhì)量控制要點至關(guān)重要。自身抗體檢測質(zhì)量控制要點包括分析前(例如:項目編號、運輸、接收離心預(yù)處理等)、分析中(例如:實驗操作、主觀判斷等)和分析后(例如:結(jié)果判斷、檢驗報告書寫、失控原因分析等)[12],這三部分質(zhì)量控制做不好都會導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果,從而影響檢測數(shù)據(jù)的真實性。
4.3提高實習(xí)生質(zhì)量控制意識
檢驗實習(xí)生對質(zhì)量控制意識不強,帶教教師應(yīng)讓實習(xí)生學(xué)習(xí)并掌握自身抗體檢測質(zhì)量控制理念和方法,嚴格按照實驗室SOP文件操作,控制自身抗體檢測的檢測條件和過程[5]。相關(guān)質(zhì)量負責(zé)人必須加強對實習(xí)生自身抗體檢測質(zhì)量控制培訓(xùn),培養(yǎng)實習(xí)生從一開始實習(xí)就意識到質(zhì)量控制在檢驗科工作中的重要性[12]。
5加強檢驗醫(yī)師和臨床醫(yī)師的溝通
免疫學(xué)檢驗與臨床緊密結(jié)合。日常工作中檢驗醫(yī)師與臨床醫(yī)師要相互交流學(xué)習(xí),特別當(dāng)遇到疑難案例時。如發(fā)現(xiàn)某種自身抗體檢測實驗室結(jié)果與臨床情況不符時,臨床醫(yī)生和檢驗醫(yī)生應(yīng)對患者的臨床癥狀及實驗室相關(guān)檢測結(jié)果進行充分交流溝通,必要時會診,需要結(jié)合患者臨床癥狀、病史、性別、年齡及其他實驗室指標等進行綜合評價,探討患者下一步更好的治療方案[10-13]。此外,在臨床免疫學(xué)檢驗專業(yè)教師與風(fēng)濕免疫科醫(yī)師進行臨床案例溝通時,應(yīng)盡可能使實習(xí)生參與進來,進一步培養(yǎng)實習(xí)生自身抗體檢測結(jié)果在臨床自身免疫性疾病診斷中的應(yīng)用分析能力等,讓實習(xí)生知道,檢驗與臨床息息相關(guān)以及與臨床溝通的重要性。
6注重前沿知識的講授
俗話說:“授人以魚,不如授人以漁。”帶教教師可通過前沿知識的講授,教會實習(xí)生如何獲取專業(yè)相關(guān)最新知識并運用這些新知識來解決工作中遇到的疑難問題[8]。帶教期間定期為實習(xí)生舉辦專題講座至關(guān)重要,如自身抗體及自身免疫性疾病(AID)檢測及研究新進展等。帶教教師可向?qū)嵙?xí)生介紹最新文獻及相關(guān)專家共識,但自身免疫性疾病(AID)研究內(nèi)容復(fù)雜,實習(xí)生理解困難,帶教教師在講課時,要采用合適的教學(xué)策略及方法,準確把握教學(xué)的重點及難點,循序漸進,由淺入深,方便實習(xí)生理解掌握。帶教教師可在每次課后布置相應(yīng)作業(yè)或安排某實習(xí)生下次上臺講課,使教師和實習(xí)生進行角色互換,讓實習(xí)生自己查閱相關(guān)書籍或文獻完成作業(yè),這樣不僅可以讓實習(xí)生養(yǎng)成主動學(xué)習(xí)、獨立分析問題的好習(xí)慣,還可以不斷提升其專業(yè)水平以及激發(fā)他們在今后的工作學(xué)習(xí)中時刻保持積極向上的實踐動力[5-6]。
7加強本科生畢業(yè)論文帶教
根據(jù)醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)的學(xué)科特點、課程性質(zhì)和學(xué)生素質(zhì)培養(yǎng)要求,將醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)的所有課程劃分為六大類課程群:通識課程、專業(yè)基礎(chǔ)課程、臨床醫(yī)學(xué)課程、專業(yè)課程、選修課程和實訓(xùn)課程。通識課程包括高教部規(guī)定的所有基本課程。專業(yè)基礎(chǔ)課程又稱基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課。是醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)的主干學(xué)科,包括無機化學(xué)、有機化學(xué)、分析化學(xué)、正常人體解剖學(xué)、組織胚胎學(xué)、生理學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)、病理學(xué)、病理生理學(xué)、醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué)等。臨床醫(yī)學(xué)課是醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)的主要學(xué)科,它包括內(nèi)科學(xué)、外科學(xué)、婦科學(xué)、兒科學(xué)、診斷學(xué)。專業(yè)課是醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)的主干學(xué)科,包括臨床基礎(chǔ)檢驗、衛(wèi)生檢驗概論、臨床生化檢驗、分子診斷學(xué)、臨床檢驗儀器學(xué)、臨床微生物學(xué)檢驗、臨床寄生蟲學(xué)檢驗、臨床血液學(xué)檢驗、臨床免疫學(xué)檢驗、臨床輸血學(xué)等。選修課程,除了學(xué)校目前已經(jīng)存在的公共選修課和醫(yī)藥類選修課以外,還建議開設(shè)醫(yī)學(xué)文獻檢索、治療藥物監(jiān)測、專業(yè)外語、醫(yī)學(xué)科研設(shè)計、細胞病理學(xué)檢驗、床旁檢測、實驗室信息系統(tǒng)、試劑盒研發(fā)、實驗動物學(xué)、檢驗核醫(yī)學(xué)等選修課,從而拓展學(xué)生的專業(yè)素質(zhì)、突出檢驗專業(yè)的特色,同時還要嚴格要求專業(yè)選修課的最低學(xué)分。實訓(xùn)課程即實習(xí)課,應(yīng)統(tǒng)計出學(xué)分,包括軍事訓(xùn)練、社會實踐、臨床見習(xí)、畢業(yè)實習(xí)、畢業(yè)論文(設(shè)計)等。
2課程設(shè)置
2.1課程的調(diào)整與整合
將生理學(xué)、病理學(xué)、病生學(xué)的實驗等基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實驗課程整合成《機能學(xué)實驗》;將無機化學(xué)、有機化學(xué)和分析化學(xué)實驗整合為《醫(yī)用化學(xué)綜合實驗》;將內(nèi)、外、婦、兒等臨床課程整合成《臨床醫(yī)學(xué)概要》。這樣既減輕了繁重的教學(xué)任務(wù),也減輕了學(xué)生的學(xué)習(xí)負擔(dān)。醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)的專業(yè)課包括《臨床免疫學(xué)檢驗》《臨床微生物學(xué)檢驗》《臨床生物化學(xué)檢驗》專業(yè)基礎(chǔ)課包括《醫(yī)學(xué)免疫學(xué)》《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》《生物化學(xué)》等,這些課程之間存在著部分內(nèi)容重復(fù)以及內(nèi)容銜接不當(dāng)?shù)膯栴},以至于學(xué)生在學(xué)習(xí)專業(yè)課程時常會遺忘了之前基礎(chǔ)課中所學(xué)過的相關(guān)知識。為此,老師授課時不得不重復(fù)基礎(chǔ)課的內(nèi)容。因此,建議將專業(yè)基礎(chǔ)課與專業(yè)課程合并在一起,使學(xué)生在學(xué)習(xí)完專業(yè)基礎(chǔ)知識后更好地繼續(xù)學(xué)習(xí)臨床技能。《分析化學(xué)》包括化學(xué)分析和儀器分析,學(xué)時較多,針對現(xiàn)代檢驗技術(shù)專業(yè)的特點,即已進入儀器檢驗的時代,因此該門課應(yīng)側(cè)重儀器分析的講解,減少化學(xué)分析授課的比重。
2.2設(shè)置臨床見習(xí)期
現(xiàn)有的課程設(shè)置與臨床實踐結(jié)合的還不夠密切,由于未能很好地讓學(xué)生早期接觸臨床,致使部分學(xué)生并不知道臨床檢驗報告是什么,不知道檢驗報告上各項指標代表何意,也就更談不上有專業(yè)感情。因此,建議在對學(xué)生進行專業(yè)課教學(xué)之前應(yīng)安排學(xué)生在醫(yī)院的檢驗科臨床見習(xí)一段時間,具體了解檢驗工作的流程,培養(yǎng)學(xué)生的感性認識,加深對檢驗知識的印象,達到百聞不如一見的效果。醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)的課程教學(xué)應(yīng)該針對檢驗技師的培養(yǎng)目標,強化檢驗專業(yè)的特色,突出檢驗技師崗位的基本能力和基本素質(zhì)培養(yǎng),具體表現(xiàn)在檢驗方法學(xué)、實驗種類、檢驗項目、技術(shù)種類等教學(xué)內(nèi)容的特色和優(yōu)勢。
2.3增設(shè)一些有特色的選修課
以加強學(xué)生對當(dāng)前最新技術(shù)的了解和應(yīng)用。如針對檢驗科的大型儀器設(shè)備,檢驗人員只需了解儀器性能及常見故障排除。因此,可以將《檢驗儀器維修》這門課程改為選修課或以專題講座形式開出。也可將幾門臨床主干課程中的臨床檢驗儀器集中為臨床檢驗儀器學(xué)課程,避免重復(fù)講授。為加強實驗室質(zhì)量控制,開設(shè)《臨床實驗室管理》課程,可以將生化、免疫、細胞等質(zhì)量管理的內(nèi)容集中起來,不必在多門專業(yè)課中重復(fù)講授;而針對《臨床實驗室管理》內(nèi)容比較抽象,可以組織學(xué)生在臨床實習(xí)期間邊實踐邊學(xué)習(xí),其教學(xué)效果會更好。
3課程開設(shè)順序
課程開設(shè)順序總體要求是通識課程、專業(yè)基礎(chǔ)課程、臨床醫(yī)學(xué)課程、專業(yè)課程、選修課,這樣依照學(xué)科的發(fā)展、知識的關(guān)聯(lián)與銜接來設(shè)置。有平行課程時要平衡開課實驗室和教研室的學(xué)年工作量。實訓(xùn)課中的軍事訓(xùn)練建議在新生入學(xué)時安排,以規(guī)范學(xué)生的行為習(xí)慣,養(yǎng)成良好的時間觀念、組織紀律觀念、集體觀念和講求規(guī)范及雷厲風(fēng)行的工作作風(fēng),促進校風(fēng)校紀建設(shè);社會實踐課應(yīng)安排在每年的寒假和暑假進行;臨床見習(xí)時間宜安排在進入專業(yè)課之前;畢業(yè)實習(xí)安排在最后一學(xué)年。
4課程學(xué)時的設(shè)置和教學(xué)內(nèi)容的要求
英文名稱:Journal of Medical Molecular Biology
主管單位:中華人民共和國教育部
主辦單位:華中科技大學(xué)同濟學(xué)院
出版周期:雙月刊
出版地址:湖北省武漢市
語
種:中文
開
本:大16開
國際刊號:1672-8009
國內(nèi)刊號:42-1720/R
郵發(fā)代號:38-35
發(fā)行范圍:國內(nèi)外統(tǒng)一發(fā)行
創(chuàng)刊時間:1978
期刊收錄:
CA 化學(xué)文摘(美)(2009)
Pж(AJ) 文摘雜志(俄)(2009)
中國科學(xué)引文數(shù)據(jù)庫(CSCD―2008)
核心期刊:
中文核心期刊(1992)
期刊榮譽:
聯(lián)系方式
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關(guān)鍵詞:食品,快速檢驗技術(shù),應(yīng)用,發(fā)展
中圖分類號:F416文獻標識碼: A
前言:隨著人們生活水平的提高,各種食品安全問題層出不窮,加強對食品安全的檢測成為有關(guān)部門的重中之重。與此同時,食品快速檢驗技術(shù)得到了進一步的應(yīng)用和發(fā)展。
1.食品快速檢驗技術(shù)的應(yīng)用的重要性
快速檢驗法的應(yīng)用有效地提高了食品安全工作者對食品質(zhì)量的評判能力。這種方法主要針對食品的部分理化指標進行檢測,在對食品質(zhì)量進行定性的時候相較于以往的感官判斷更準確、合理。借助快速檢驗法,食品安全監(jiān)督工作者可以準確理性的對食品的安全性進行判斷。如此,避免了感官判斷準確率低的問題,是食品安全監(jiān)督朝著優(yōu)質(zhì)、高效目標發(fā)展的重要表現(xiàn)。隨著快速檢驗方法的廣泛使用,食品安全監(jiān)管體系逐步完善,市場上的不合格的食品可以快速準確的被食品藥品監(jiān)督管理局的工作者準確識別,為消費者創(chuàng)造了一個安全的食品環(huán)境。該方法的實施也對那些非法食品經(jīng)營者形成了強大的威懾力。檢測箱只是一個小小的箱子,但是它給社會帶來的影響卻是巨大的,它有效地降低了市場上食品的危險性,維護了社會的穩(wěn)定。
2 食品快速檢驗方法的形式及應(yīng)用
2.1 試管法
試管法可用速測管顯色半定量或定性對樣品進行快速檢測,可用于亞硝酸鹽、二氧化硫、鼠藥、甲醇等的測定。目前試劑盒也被廣泛應(yīng)用于現(xiàn)場快速檢測中。如酶聯(lián)免疫(ELISA)快速檢測試劑盒應(yīng)用于食品農(nóng)藥殘留免疫檢測, 將會成為食品農(nóng)藥殘留和食品安全質(zhì)量控制的有效快速檢測手段。目前大多物質(zhì)的檢測方法都可以試劑盒形式存在,如慢抗試劑盒(如β內(nèi)酰胺酶檢測試劑盒和總抗生素檢測試劑盒)以及環(huán)丙沙星等藥物試劑盒的產(chǎn)品已被廣泛應(yīng)用于市場中。
2.2 便攜式儀器法
便攜式檢測儀在食品檢驗工作中被廣泛應(yīng)用,適用于農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)測站、田間地頭果蔬的檢驗以及商貿(mào)批發(fā)市場、酒店等處果蔬的檢測。以李培武研究員為首的研究組在國內(nèi)外首創(chuàng)了黃曲霉毒素B1親和微球快速檢測技術(shù),研制開發(fā)出黃曲霉毒素B1專用定量熒光避測儀,該測試儀測試靈敏度和準確度高,最低檢測限達到0.3μg/kg。便攜式儀器具有體積小、重量輕、精度高、快速檢測等優(yōu)點,也是當(dāng)前被廣泛應(yīng)用的快速檢測方法之一,可結(jié)合不同技術(shù)制備得到檢測儀,應(yīng)用于各種食品檢測中。
3 生物檢測技術(shù)在食品快速檢驗方法中的應(yīng)用
3.1 免疫學(xué)技術(shù)
免疫學(xué)技術(shù)是指抗原與抗體之間的特異性免疫反應(yīng),即在體內(nèi)發(fā)生,也可以在體外發(fā)生。不同的微生物具有特異的抗原,輔以免疫放大技術(shù)制備相應(yīng)的多克隆抗體或單克隆抗體,就可以鑒別目的微生物存在與否,并較準確地檢測出其含量。目前用于食品安全檢測中的免疫技術(shù)主要有酶聯(lián)免疫法(ELISA)、免疫磁珠分離技術(shù)、免疫力檢測試劑條、免疫乳膠試劑、免疫深沉法或免疫色譜法等。1989年美國食品安全檢驗局就已將免疫技術(shù)應(yīng)用于肉類及家禽的檢驗中,并制定了相關(guān)檢驗標準。免疫學(xué)技術(shù)具有靈敏度高、特異性高、可定量分析、簡便安全等優(yōu)點,廣泛應(yīng)用于細菌、霉菌、及細菌和真菌毒素等的檢測中。
3.2 分子生物學(xué)技術(shù)
3.2.1 DNA探針技術(shù)DNA探針技術(shù)又稱核酸探針技術(shù)和分子雜交技術(shù),是指能與特定核苷酸序列發(fā)生特異互補雜交,雜交后又能被特殊方法檢測的已知被標記(同位素或非同位素標記)的核苷酸鏈。廣泛用于食品中致病菌和病原體檢驗等方面。基因探針法具有準確性和靈敏度高,針對性強,檢測快速等特點。
3.2.2 PCR技術(shù)
聚 合 酶 鏈 式 反 應(yīng) 技 術(shù) 簡 稱 P C R(Polymerase Chain Reaetion)技術(shù),是一種能夠在生物體外快速擴增特定基因或DNA序列的方法,早期應(yīng)用于基因克隆和轉(zhuǎn)基因檢測,后來被廣泛應(yīng)用于食品快速檢驗中,并且被認為是食源性致病菌快速和準確的檢測方法。PCR技術(shù)可用于大腸桿菌、單核細胞增生李斯特菌及其他食品中致病菌的檢測。PCR技術(shù)結(jié)合其他技術(shù)形成一種穩(wěn)定、靈敏、易操作且成本低廉的技術(shù)。
3.2.3 基因芯片技術(shù)
基因芯片又稱生物芯片技術(shù),是指將大量DN段(即探針分子)固定于支持物上后與標記的樣品分子進行雜交,通過探針分子上雜交信號的強度檢測出樣品分子數(shù)量及序列信息。主要用于基因檢測工作,可用于食品中常見致病菌的檢測。
3.3 生物傳感器技術(shù)
生物傳感器技術(shù)是由生物識別系統(tǒng)和信號轉(zhuǎn)換器組成,通過酶、抗原、抗體、微生物、核酸等生物活性物質(zhì)作為識別元件,電化學(xué)、信號放大裝置或場效應(yīng)管、壓電晶體等傳感器把待測物濃度轉(zhuǎn)為電信號,再根據(jù)電信號測出待測物濃度。該檢測方法經(jīng)濟、簡便,不需要預(yù)處理;具有專一性強、靈敏度高、選擇性及抗干擾能力強;體積小,方便攜帶,可實現(xiàn)現(xiàn)場檢測和連續(xù)在線監(jiān)測;操作系統(tǒng)簡單、容易實現(xiàn)自動分析,準確度高;樣品用量小,響應(yīng)快,敏感材料可反復(fù)使用;此外生物傳感器可得到的信息量大。生物傳感器可用于食品中蛋白質(zhì)、糖、氨基酸以及食品添加劑等多方面領(lǐng)域。
3.4 代謝學(xué)技術(shù)
代謝學(xué)技術(shù)是指利用微生物代謝的理論,通過對其生長過程中相關(guān)底物和代謝產(chǎn)物和電阻抗的變化特性進行檢測,從而達到微生物檢測目的的方法。
3.4.1 電阻抗技術(shù)
生物電阻抗測量,簡稱阻抗技術(shù),是通過測量微生物代謝引起的培養(yǎng)基電特性變化來測定樣品微生物含量的一種快速檢測方法。微生物在培養(yǎng)過程中,生理代謝作用使培養(yǎng)基中的電惰性物質(zhì),如碳水化合物、類脂、蛋白質(zhì)等轉(zhuǎn)化為電活性物質(zhì),如乳酸鹽、醋酸鹽等,使培養(yǎng)基的電阻發(fā)生變化,電阻性增強,電阻抗降低,由此可判定微生物在培養(yǎng)基中的生長繁殖情況。陳廣全等人采用該法檢測食品中沙門氏菌。
3.4.2 微熱量計
技術(shù)微熱量計技術(shù)是通過測定微生物生長時產(chǎn)生熱量的變化檢出和鑒別微生物。微熱量計具有恒溫精度高、檢測靈敏、操作簡單等特點,特別適用于熱效應(yīng)小和緩慢的生物過程的研究和檢測。
3.4.3 放射測量技術(shù)
放射測量技術(shù)是用14C標記微生物生食品快速檢驗技術(shù)的應(yīng)用及研究進展長繁殖過程中所利用的碳水化合物等代謝底物,并測量微生物代謝產(chǎn)生的14CO2含量,從而判斷微生物的量。該方法用于檢測細菌,具有快速、準確等特點。
4 總結(jié)
綜上所述,食品快速檢驗方法種類繁多,具有較好的特異性、高效性和準確性,且檢測快速等優(yōu)點,但是不管是哪一種檢測方法都具有一定的局限性,非生物檢測方法,不具有特異性操作相對生物檢測法復(fù)雜等缺點;生物檢測法雖然生物特異性高,操作方便簡單,但其成本相對較高,且當(dāng)待測物中含有與目標菌競爭性物質(zhì)時可能會出現(xiàn)假陽性等缺陷。因此,若要達到食品快速檢驗技術(shù)的完善,就必須在發(fā)展新技術(shù)的同時,也要加強對現(xiàn)有的技術(shù)綜合利用的研究,以使食品檢測技術(shù)達到理想的效果。
參考文獻
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馬弋,1977年12月生于浙江省金華市。華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院碩士。現(xiàn)任職于湖北省疾病預(yù)防控制中心衛(wèi)檢所,湖北省衛(wèi)生檢驗專業(yè)委員會秘書。研究方向為食品安全風(fēng)險監(jiān)測及微生物學(xué)檢驗。曾在SCI及國內(nèi)核心期刊上公開發(fā)表專業(yè)論文20余篇,參編著作1本,參與起草國家食品安全標準3個,獲湖北省及武漢市科技成果獎各1次。
近年來,食品安全事件的頻繁出現(xiàn)給廣大消費者的生命安全與健康,不斷帶來風(fēng)險和精神恐慌,食品安全現(xiàn)已成為不可忽視的重要公共衛(wèi)生問題。2009年頒布的《中華人民共和國食品安全法》明確規(guī)定了各級檢測機構(gòu)在食品安全事件處理中的重要職責(zé),這就要求相關(guān)人員不僅必須具食品安全保障的基本能力,還應(yīng)具應(yīng)對各類食源性致病菌引起的突發(fā)公共衛(wèi)生事件的監(jiān)測、檢驗?zāi)芰Γ瑸槭称钒踩A(yù)警提供科學(xué)的技術(shù)支持。與傳統(tǒng)的微生物檢測方法相比,一些更加快速,準確的新方法正在逐步普及。特別是一些生化和分子生物學(xué)儀器的使用,既節(jié)省了人力成本和時間,也提高了檢測的靈敏度和準確性。為了進一步的了解食源性致病菌的流行病學(xué)特點及實驗室檢測,我們邀請到湖北省疾病預(yù)防控制中心的馬弋老師,請他與大家共同分享解決食源性致病菌檢測問題的成功經(jīng)驗。
記者:常見的食源性致病菌檢測項目有哪些?請舉例說明一些常見食源性致病菌的特點及其致病機理?
馬弋:常見的食源性致病菌檢測項目主要分為定量檢測和定性檢測,定量檢測主要是針對一些衛(wèi)生指標菌,它能反映出食品受到污染的程度,例如細菌總數(shù)和大腸菌群的檢測;而定性檢測的致病菌一般都是在某一類食品中不得檢出的,不同的食品容易受到污染的致病菌也有所不同,比如說禽類食品容易受到沙門氏菌的污染,沙門氏菌是一種常見的腸道病原菌,全世界已發(fā)現(xiàn)的血清型有2500多種,不產(chǎn)生外毒素,有較強的內(nèi)毒素,并有一定的侵襲力,個別菌還能產(chǎn)生腸毒素,其中傷寒沙門氏菌能夠引起腸熱癥為主的傷寒,副傷寒,是我國《傳染病防治法》中規(guī)定報告的乙類傳染病之一,而非傷寒沙門氏菌則會引起胃腸炎和敗血癥。與此同時,嬰幼兒奶粉及米粉中的阪崎腸桿菌的安全性問題,近年來已成為全球關(guān)注的焦點,2008版的國家標準GB/T4789《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗》就把它作為新增菌納入進去,它主要引起嬰兒患上腦膜炎,壞死性小腸結(jié)腸炎、菌血癥和嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。此外,海產(chǎn)品中以副溶血性弧菌最為常見,該菌進入人體后會在消化道內(nèi)迅速繁殖生長,產(chǎn)生大量的腸毒素。患者會出現(xiàn)劇烈腹痛、腹瀉,嘔吐和發(fā)熱,大多數(shù)患者會中度脫水,如果搶救不及時,患者會因為嚴重脫水而有生命危險。
記者:結(jié)合您多年來微生物檢驗經(jīng)驗?zāi)X得微生物檢驗的難點及核心要素主要體現(xiàn)在哪些方面?
馬弋:我個人覺得最大的難點及核心是對致病菌的定量檢測,因為致病菌長期與人類共存,大部分致病菌都是我們腸道內(nèi)常見的菌群,大多都是條件致病菌,只有達到一定的量,超過了一定的發(fā)病閾值才引起發(fā)病,所以食物中檢出陽性致病菌并不一定發(fā)病,而且食物的一些加工過程也可以殺滅致病菌,所以定量的概念很重要。由于細菌的生長和環(huán)境密切相關(guān),數(shù)量是不斷在發(fā)生變化的,所以最難的還是定量。再一個就是細菌的耐藥性,現(xiàn)在由于抗生素的濫用,導(dǎo)致臨床醫(yī)生很難選擇合適的抗生素對病人進行救治,所以在監(jiān)測致病菌的同時最好能對其耐藥譜進行一個檢測。如果只做定性檢測,難點在于檢測方法的靈敏度,這跟檢驗人員的經(jīng)驗,培養(yǎng)基的質(zhì)量,儀器設(shè)的使用等因素相關(guān)。
記者:鑒于食源性致病菌的上述特性,其檢測技術(shù)也需要不斷更新以滿足檢測高要求,那么未來一段時間內(nèi),檢測技術(shù)的發(fā)展方向是什么?
馬弋:與傳統(tǒng)的檢測方法相比較,新型的微生物檢測技術(shù)正向快速的分子生物學(xué)技術(shù),免疫學(xué)技術(shù),代謝技術(shù)、基因指紋圖譜技術(shù),自動化儀器、生物傳感器等方向發(fā)展。
記者:在此您能否介紹幾種新的檢測方法?
馬弋:新型快速檢測技術(shù):
1、API手工生化鑒定系統(tǒng):最常見的有用于革蘭氏陰性桿菌鑒定的API20E。
2、以免疫學(xué)方法建立的快速檢測技術(shù):免疫測定法的代表技術(shù)是ELISA技術(shù),是抗原或抗體吸附到固相載體上作為一種試劑,來檢測標本中有無相應(yīng)的抗體或抗原的一種方法。ELISA具有高度的特異性和敏感性,幾乎所有可溶性的抗原抗體反應(yīng)系統(tǒng)均可檢測。與免疫熒光技術(shù)相比,ELISA敏感性高,不需特殊設(shè),結(jié)果觀察簡便。
3、分子生物學(xué)方法鑒定系統(tǒng):是從分子生物學(xué)水平上研究生物大分子特別是核酸結(jié)構(gòu)及其組成部分。在此基礎(chǔ)上建立的眾多檢測技術(shù)中,核酸探針和聚合酶鏈反應(yīng),以其敏感,特異,簡便、快速的特點成為世人矚目的生物技術(shù)革命的新產(chǎn)物,除了可用于初篩檢測,由于其具有高特異性和敏感性,也可直接用于微生物的鑒定。
4、自動化儀器。
半自動微生物鑒定系統(tǒng):是由微量生化檢測系統(tǒng)發(fā)展而來。其原理是將各種不同的生化反應(yīng)組成專一鑒定試劑條(或板)。經(jīng)培養(yǎng)后用光電讀數(shù)器自動讀數(shù),將數(shù)據(jù)自動傳送到計算機,由計算機分析處理,并打印結(jié)果分析報告。這一類的鑒定系統(tǒng)主要有:ATB(法國梅里埃公司),BIOLOG(美國BIOLOG)等,半自動微生物鑒定系統(tǒng)除了鑒定微生物外,也可進行藥敏試驗。
Vitek全自動細菌鑒定系統(tǒng):采用光電技術(shù),電腦技術(shù)和細菌八進位制數(shù)碼鑒定相結(jié)合。對各反應(yīng)孔底物進行光掃描,動態(tài)觀察反應(yīng)變化,一旦試卡內(nèi)終點指示孔到達臨界值,指示反應(yīng)完成,系統(tǒng)將最后一次判讀的結(jié)果所得生物數(shù)碼與菌種庫標準菌生物模型相比較,經(jīng)矩陣分析得出鑒定值和鑒定結(jié)果,并自動打印報告。
首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院實驗診斷中心就是這樣一個從事健康評價、高危預(yù)測和個體化診斷的綜合平臺。健康評價即我們常說的健康體檢,高危預(yù)測是指對基因檢測結(jié)果和家族史等信息進行綜合分析后所提出的易發(fā)生疾病人群的提示。個體化診斷是綜合當(dāng)代科學(xué)理論及技術(shù)手段,結(jié)合中醫(yī)辨證的理論,對個體進行全面分析后得出的針對個體的評價和診斷,從而指導(dǎo)個體化醫(yī)療建立實驗室健康評估體系。
實驗室在保障人類健康上的作用越來越重要,社會性、標準化國際性是對先進實驗室提出的要求。國際上對醫(yī)學(xué)實驗室從技術(shù)能力、管理能力等不同的角度上進行評價。近年來,國際醫(yī)學(xué)界非常重視醫(yī)學(xué)實驗室的質(zhì)量管理國際標準化組織頒布了《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力專用要求》,即lS015189,以推動全球?qū)嶒炇覙藴驶?guī)范化建設(shè),2004年中國合格評定國家實驗室認可委員會將此標準引進了國內(nèi),并把它作為一個與國際接軌的方法進行執(zhí)行,幾年來,我國僅有8個實驗室通過認可。北京天壇醫(yī)院實驗診斷中心負責(zé)人康熙雄教授不但在專業(yè)領(lǐng)域是頂尖學(xué)者,而且具有很強的管理能力,他所領(lǐng)導(dǎo)的北京天壇醫(yī)院實驗診斷中心是首批被認證的實驗室,這意味著北京天壇醫(yī)院實驗診斷中心在臨床標本檢測,藥品評估等方面已經(jīng)實現(xiàn)國際互認,患者拿到此處出具的檢驗報告單在國外也同樣有效。
為了發(fā)展和不斷提高,天壇醫(yī)院實驗診斷中心堅持發(fā)展科研,不斷探索,在與相關(guān)專家反復(fù)研討后,先后在健康評價體系和檢測方法的研究等方面承擔(dān)國家和地方的課題7項,建立了新生兒,少年、青年、壯年、老年以及女性的生長不同期所需要的評價體系,深入研究個體化診斷。
今年天壇醫(yī)院實驗診斷中心承辦2007年全國現(xiàn)代免疫診斷方法暨高通量檢測技術(shù)臨床研究發(fā)展論壇,討論了在健康評價手段和檢測方法等方面的國內(nèi)外新進展。來自全國21個省市自治區(qū)的近400名代表們歡聚一堂討論了世界本行業(yè)最新話題。會議中,通過互聯(lián)網(wǎng)實現(xiàn)了國內(nèi)專家與美國專家的實時在線討論,引進美國同行的思路,引進他們在技術(shù)和管理等方面的先進經(jīng)驗。
實驗診斷中心負責(zé)人康熙雄,現(xiàn)任首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院實驗診斷中心主任、主任醫(yī)師、教授、博士生導(dǎo)師、首都醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗診斷學(xué)系主任,中國檢驗醫(yī)師協(xié)會副會長、全國診斷學(xué)指導(dǎo)委員會主任委員、中國實驗室管理協(xié)會常務(wù)委員、中國衛(wèi)生部標準化委員會檢驗分會委員。
“以前,我們只認識到人體2000個功能基因,醫(yī)院檢驗科只能提供幾十個到上百個檢驗項目,進入21世紀,我們已經(jīng)認識到人體的功能基因約有3萬個,這就對我們檢驗科提出了一個問題,我們到底要檢查幾項? 200個?還是2000個?還是兩萬個?同時,我們獲取到近萬個參數(shù),又該如何處理這些信息,并通過這些信息來評價患者健康和疾病狀態(tài)呢?這些都是我們要討論和研究的。”
康熙雄教授多年從事臨床檢驗診斷學(xué),臨床免疫病、腫瘤的診斷和治療等工作,曾在東京大學(xué)參加腫瘤基因治療,在神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病,自身免疫性腎病等自身免疫病及腫瘤的臨床診治方面積累了豐富的經(jīng)驗,2002年康教授提出“個體化診斷系統(tǒng)的建立和臨床應(yīng)用”的研究方向,并利用分子生物學(xué)等各種前沿方法學(xué),進行“藥物代謝基因組學(xué)、臨床蛋白組學(xué)、臨床代謝組學(xué)、功能蛋白相互作用疾病診斷模型”等多方位的實驗診斷學(xué)臨床應(yīng)用研究,主編出版了《臨床電泳》《臨床蛋白質(zhì)組學(xué)》《臨床免疫學(xué)》等多部專著,多篇論文被SCI收錄。目前,在他的積極籌劃下,以天壇醫(yī)院實驗診斷中心為基地,搭建起包括多種先進儀器設(shè)備蛋白質(zhì)飛行質(zhì)譜檢測儀、高效液相色譜、凝膠成像系統(tǒng)、基因芯片儀、懸浮微陣列檢測儀、熒光定量實時在線核酸擴增儀、流式細胞儀、蛋白芯片檢測儀、芯片點樣儀、細胞培養(yǎng)系統(tǒng)等)的共享性的臨床蛋白質(zhì)組學(xué)檢測平臺、基因檢測平臺、細胞培養(yǎng)平臺、為開展臨床科研工作提供了良好的條件,也具備了應(yīng)對嚴重生物性災(zāi)害的應(yīng)急能力。
2003年的SARS考驗著每一個醫(yī)藥工作者,為保護人民大眾的健康,檢驗工作更不能有任何閃失,在SARS過后更應(yīng)該如此,SARS期間,康教授領(lǐng)導(dǎo)天壇醫(yī)院實驗診斷中心承擔(dān)了863子課題“傳染性非典型肺炎流行病學(xué)特征及其早期快速診斷技術(shù)應(yīng)用”的研究,并總結(jié)抗擊SARS過程中實驗室診斷經(jīng)驗,先后主編出版了《SARS實驗室診斷》(人民衛(wèi)生出版社)、《“非典”的實驗室檢測及診斷》(科技出版社),于2003年7月參加國際SARS研討會并作大會發(fā)言得到國際組織和專業(yè)團體的關(guān)注,也得到總理的肯定和市政府的嘉獎。
醫(yī)學(xué)研究生的培養(yǎng)是醫(yī)學(xué)人才培養(yǎng)體系的重要組成部分,隨著我國社會經(jīng)濟的發(fā)展,對醫(yī)學(xué)研究生的培養(yǎng)提出了新的要求。由于基礎(chǔ)研究與臨床實踐相結(jié)合是醫(yī)學(xué)發(fā)展的必然趨勢,無論是臨床醫(yī)生還是基礎(chǔ)研究人員都認識到加強臨床與基礎(chǔ)結(jié)合的重要性[2],因此,在醫(yī)學(xué)教育過程中采取基礎(chǔ)與臨床相結(jié)合的培養(yǎng)模式,為醫(yī)學(xué)人才培養(yǎng)體系的創(chuàng)新和改革提供了新的思路。
基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)是我校重點建設(shè)學(xué)科,和其他醫(yī)學(xué)院校相似,我校的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究生在招生、培養(yǎng)和就業(yè)中存在生源欠佳、培養(yǎng)模式和課程設(shè)置不合理、學(xué)科發(fā)展薄弱、就業(yè)渠道不暢等問題[M]。如果采取基礎(chǔ)與臨床相結(jié)合的模式進行培養(yǎng),將有助于提高基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究生的綜合醫(yī)學(xué)研究素質(zhì),拓寬學(xué)術(shù)視野和就業(yè)途徑。
但是,在培養(yǎng)過程中如何做到臨床醫(yī)學(xué)與基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)有機融合,以及在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)各學(xué)科和專業(yè)中的具體操作措施,還是一個值得探討和研究的課題。近年來,針對我校基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究生教育中曾存在的基礎(chǔ)研究與臨床實踐脫節(jié)等情況,我們在導(dǎo)師選拔、課程設(shè)置和學(xué)位論文課題等方面注重基礎(chǔ)與臨床的有機結(jié)合,積極探索基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究生培養(yǎng)模式的理論創(chuàng)新和實踐改革,并取得了初步成效,進一步推動和加強了我校基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教師與臨床一線醫(yī)技人員的交流和融合,提高了基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究生的培養(yǎng)質(zhì)量。
1增強基礎(chǔ)研究人員與臨床醫(yī)技人員的交流,組建聯(lián)合導(dǎo)師組
為了保證基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究生解決臨床實際問題的學(xué)術(shù)視野和科研技能,在師資力量配備上注重基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教師和臨床醫(yī)技人員的交叉與融合。我們利用學(xué)校附屬醫(yī)院的資源組建了臨床與基礎(chǔ)相結(jié)合的師資隊伍,根據(jù)研究方向,由基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教師和相關(guān)臨床醫(yī)技人員組建聯(lián)合導(dǎo)師組。
例如,聯(lián)合神經(jīng)外科、骨科和腦外科等臨床科室的教師組建人體解剖與組織胚胎學(xué)專業(yè)導(dǎo)師組,聯(lián)合醫(yī)學(xué)檢驗科、感染科等科室的教師組建病原生物學(xué)和免疫學(xué)專業(yè)導(dǎo)師組,聯(lián)合病理科、腫瘤科和ICU等科室的教師組建病理學(xué)與病理生理學(xué)專業(yè)導(dǎo)師組,聯(lián)合放射科、核醫(yī)學(xué)等臨床科室的教師組建放射醫(yī)學(xué)專業(yè)導(dǎo)師組。導(dǎo)師組根據(jù)學(xué)生人學(xué)前的專業(yè)基礎(chǔ)、研究方向及學(xué)生的研究興趣,制定基于臨床實踐與基礎(chǔ)研究相結(jié)合的個性化培養(yǎng)方案,在基礎(chǔ)導(dǎo)師和臨床導(dǎo)師的共同指導(dǎo)下,完成學(xué)位論文選題、課題設(shè)計及實施,并且保證每個研究生可以在與研究方向相關(guān)的臨床科室調(diào)研、實習(xí)或?qū)嵺`,充分依托臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)資源為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)人才培養(yǎng)服務(wù)。
2調(diào)整課程設(shè)置
為了適應(yīng)社會發(fā)展趨勢,近年來我們在研究生課程設(shè)置方面進行了優(yōu)化調(diào)整。首先,調(diào)整了公共課考試方式和授課學(xué)時,在對中國特色社會主義理論與實踐研究和自然辯證法等課程的考試方式進行改革的基礎(chǔ)上,減少了英語和計算機應(yīng)用課程的授課學(xué)時(分別從〗〇8學(xué)時和54學(xué)時縮減為72學(xué)時和36學(xué)時)。
基于網(wǎng)絡(luò)信息環(huán)境中的文獻檢索教學(xué)內(nèi)容和方式的新變化,醫(yī)學(xué)信息檢索與應(yīng)用課程由25學(xué)時縮減為18學(xué)時。公共課的調(diào)整為學(xué)生提供了更多專業(yè)實踐的學(xué)習(xí)時間。專業(yè)基礎(chǔ)課的設(shè)置方面,僅保留了高級生物化學(xué)、高級免疫學(xué)、細胞生物學(xué)、細胞培養(yǎng)技術(shù)、醫(yī)學(xué)科研方法學(xué)等共同基礎(chǔ)課程,其他課程由學(xué)生和導(dǎo)師組根據(jù)學(xué)生入學(xué)前所學(xué)專業(yè)及課程、研究方向等因素共同商定,實現(xiàn)了基于學(xué)生個人基礎(chǔ)和不同專業(yè)、方向培養(yǎng)目標的個性化培養(yǎng)。
在基礎(chǔ)課程的教學(xué)實踐中,我們注重加強科研實驗技能的訓(xùn)練以及基礎(chǔ)課程與臨床課程的整合,多開設(shè)臨床問題相關(guān)的專題實驗,傳授更多的技術(shù)方法,以提高學(xué)生解決臨床問題的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)科研能力。
3加強基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床實踐的學(xué)術(shù)交流,鼓勵基于臨床問題的選題研究
醫(yī)學(xué)研究的深人發(fā)展離不開基礎(chǔ)研究人員與臨床醫(yī)生的溝通。我們既鼓勵基礎(chǔ)研究人員深人臨床實踐一線尋找有意義的研究課題,也重視臨床一線醫(yī)技人員通過自己的臨床實踐經(jīng)驗為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教學(xué)和研究提供豐富的素材。為此,我們定期組織基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教學(xué)和研究人員、臨床醫(yī)技人員、研究生進行學(xué)術(shù)交流會,就肝炎、腫瘤、心血管疾病、代謝性疾病、神經(jīng)退行性疾病、糖尿病、衰老、感染與免疫等重大疾病及基礎(chǔ)與臨床研究專題展開經(jīng)驗交流并探討相關(guān)問題,最終實現(xiàn)以發(fā)現(xiàn)和解決臨床問題為導(dǎo)向的有效溝通和共同攻關(guān)。
在這種交流中,基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教學(xué)和研究人員以及研究生可以敏銳地從臨床中發(fā)現(xiàn)自己所要研究的問題,且可以得到臨床實踐人員的積極反饋,真正做到基礎(chǔ)研究與臨床實踐的協(xié)同發(fā)展,并促進醫(yī)學(xué)研究逐漸深人,從而創(chuàng)新了研究生培養(yǎng)模式[5,6]。
4促進基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)各學(xué)科整合及與臨床醫(yī)學(xué)的融合,加強學(xué)科建設(shè)
基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)作為醫(yī)學(xué)各學(xué)科的重要支撐,加強其學(xué)科建設(shè)非常必要。為了充分實現(xiàn)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)之間的交叉融合,我們首先在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)各學(xué)科之間進行了整合:將原有的人體解剖學(xué)和組織胚胎學(xué)兩個學(xué)科合并,將生理學(xué)、病理生理學(xué)整合為人體機能學(xué),將微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)和免疫學(xué)整合為病原生物學(xué)與免疫學(xué)。此外,我們還建設(shè)了由人體解剖、組織胚胎、病理解剖及病原生物等標本模塊組成的人體科學(xué)教育中心和生命科學(xué)教育中心,作為醫(yī)學(xué)人才培養(yǎng)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究與臨床實踐緊密結(jié)合的重要基地,有效實現(xiàn)了學(xué)科間科學(xué)研究和教學(xué)資源的整合,促進了基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)內(nèi)部各學(xué)科和人才培養(yǎng)體系的協(xié)調(diào)發(fā)展。同時,在學(xué)科群組建、教師申報科研課題和研究生培養(yǎng)過程中建立“以健康和疾病為基礎(chǔ),以解決實際臨床問題為導(dǎo)向”的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究和人才培養(yǎng)新模式,結(jié)合學(xué)校相關(guān)政策支持,注重基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教師和研究生的個人發(fā)展,不斷提高自身專業(yè)知識和科研素質(zhì),提升基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的學(xué)科整體發(fā)展水平。
資料與方法
實驗對象:實驗標本來自天津市泰達醫(yī)院體檢中心、天津市第三中心醫(yī)院及天津市腫瘤醫(yī)院的被檢者。正常對照組100例,男53例,女47例,年齡29~56歲,為健康的體檢者;上消化道出血確診人群44例,男24例,女20例,年齡44~78歲;下消化道出血的確診人群56例,男26例,女30例,年齡54~91歲。
實驗方法:各種檢測方法的操作按試劑盒說明書進行。每1份標本在相同條件下用3種方法檢測,記錄測定結(jié)果,用于對比分析。
結(jié)果
用蒸餾水和抗凝的新鮮全血配制一定濃度的血紅蛋白溶液,用3種方法進行靈敏度的檢測。見表1。
血紅蛋白膠體金法和轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法靈敏度幾乎相同,而化學(xué)法敏感性相對較低。
構(gòu)建量化模型標本。見表2。
血紅蛋白濃度0mg/L,結(jié)果均為陰性,說明pH不對其產(chǎn)生影響。血紅蛋白濃度相同時,pH不同時發(fā)生了變化,且pH越小(酸度越大)影響越大。
血紅蛋白膠體金法檢測結(jié)果。見表3。
血紅蛋白濃度14000和7000由于濃度太高產(chǎn)生后代現(xiàn)象,但酸度越大影響越小,說明鹽酸破壞部分血紅蛋白。
轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法檢測結(jié)果。見表4。
轉(zhuǎn)鐵蛋白在pH 1~5時與空白對照(蒸餾水)相比均受到影響,但與血紅蛋白膠體金法,影響有所減小。
健康體檢者和內(nèi)鏡確診的消化道出血患者糞便標本結(jié)果。見表5。
試驗結(jié)果與臨床診斷對比分析。見表6和表7。
討論
從以上結(jié)果可以看出,化學(xué)法對血紅蛋白的檢出最低濃度10mg/L,而血紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法靈敏度比化學(xué)法高得多,其檢出最低濃度為0.2mg/L,最高檢出濃度可達2000mg/L,當(dāng)人血紅蛋白濃度>2000mg/L時,測試結(jié)果出現(xiàn)假陰性,與楊新原等1報道的膠體金法檢測便隱血的后帶現(xiàn)象相符。這種現(xiàn)象主要是由免疫學(xué)中抗原抗體反應(yīng)的原理引起的。其原理基于免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng),亦遵循pH抗原抗體反應(yīng)特點,抗原抗體比例合適反應(yīng)最充分。若抗原極度過剩則無反應(yīng)物形成,稱為后帶現(xiàn)象。過量大出血糞便中血紅蛋白濃度過高,致使反應(yīng)體系抗原過剩,便隱血試驗出現(xiàn)假陰性
結(jié)果。化學(xué)法試劑屬匹拉米洞法,利用匹拉米洞當(dāng)作呈色指示劑,在酸及過氧化氫(H2O2)的作用下,與血紅蛋白反應(yīng),產(chǎn)生經(jīng)鹽酸作用過的血紅蛋白對改良的匹拉米洞化學(xué)法、血紅蛋白膠體金法、轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法與蒸餾水相比均受到影響。產(chǎn)生這種結(jié)果的原因有兩個:pH紫藍紫紅的顏色。
的影響或(和)鹽酸本身的影響。鹽酸為酸性物質(zhì),對于抗原抗體的結(jié)合可能有一定的影響,將表中各管各取出一部分加入適量NaHCO3粉劑,調(diào)整各管至中
性(用pH值試紙測),再用3種方法進行檢測,結(jié)果不發(fā)生改變。調(diào)整了pH值后結(jié)果仍與沒有調(diào)整pH值前的結(jié)果相同,說明不是pH過低影響的,而是鹽酸破壞了的抗原結(jié)構(gòu)造成的,這種破壞是不可逆性的。通常所謂的胃酸即指鹽酸,其分泌濃度約150mmol/L,在胃液和食物等其他物質(zhì)混合后有所下降2。正常胃液的pH值0.9~1.8。所以檢測嘔吐物和胃液隱血時,也應(yīng)考慮到胃液中酸性成分的影響,最好采用化學(xué)法測定。
健康人對照組在正常飲食情況下留取糞便標本,血紅蛋白膠體金法、轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法、Hb、Tf聯(lián)合檢測法陽性均為1例,檢出率1%,而化學(xué)法檢出9例(含與其他3種方法重疊陽性1例)。經(jīng)隨訪得知,該患者留取糞便前一天鼻出血,部分血液吞咽入胃。其他8例陽性者,與正常入食的肉類、蔬菜相關(guān)聯(lián),屬于假陽性。本組約有半數(shù)消化道出血患者糞便隱血未被檢出。其原因可能有:①糞便中血紅蛋白含量太高,出現(xiàn)“后帶現(xiàn)象”,造成假陰性結(jié)果;②出血后,紅細胞在腸道停留時間久,血紅蛋白被消化酶降解或被細菌充分分解消化,使其免疫原性喪失;③患者血紅蛋白的抗原與單克隆抗體不匹配的原因3。轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法:44例上消化道出血患者糞便隱血34例陽性,檢出率77.3%;56例下消化道出血患者糞便隱血檢出44例陽性,檢出率78.6%。聯(lián)合檢測上、下消化道出血患者糞便檢出率分別為86.4%、89.3%。研究表明轉(zhuǎn)鐵蛋白與糞便混懸液在37℃孵育4小時后4,其抗原性無明顯改變,而血紅蛋白抗原活性已喪失65%,由此可見轉(zhuǎn)鐵蛋白在腸道內(nèi)抗菌能力強,自身穩(wěn)定性高于血紅蛋白5,還可以克服被檢標本中的血紅蛋白在胃腸道內(nèi)滯留時間過長而被分解或破壞,使其失去原有的免疫原性而出現(xiàn)的“假陰性”結(jié)果,因此,轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法是提高消化道出血檢出率的良好指標。
由于糞便混有血液與檢測其他液體中的血紅蛋白有所不同,因此欲獲得高符合率結(jié)果,必須遵照操作規(guī)程和說明書使用,在糞便樣本的多部位或多次取樣。從而提高消化道出血、消化道腫瘤病變及潰瘍出血的檢出率,為臨床提供其準確可靠出血診斷依據(jù),但臨床仍需綜合相關(guān)檢查及患者的臨床癥狀對消化道的出血作出準確判斷。
參考文獻
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